ЖИВИЛЬНЕ СЕРЕДОВИЩЕ САМОСУМ ДЛЯ ВИДІЛЕННЯ ЗБУДНИКА ТУБЕРКУЛЬОЗУ

В.В. Власенко, І.Г.Власенко, Колодій С.А., Дзюмак М.А., Блащук В.В.

Вінницький державний аграрний університет

У медичній та ветеринарній мікробіології відомі способи виділення збудника туберкульозу, живильні середовища та стимулятори росту для виділення збудника туберкульозу, але вони висококошторисні.

Завданням нашого дослідження було створення живильного середовища для виділення збудника туберкульозу, в якому за рахунок нового складу компонентів, їх кількісного співвідношення досягається можливість скоротити тривалість інкубування матеріалу до 24 годин, а час діагностики туберкульозу бактеріологічним способом зменшити у 30 - 90 разів.

Поставлене завдання вирішується тим, що запропоноване живильне середовище для виділення збудника туберкульозу, яке містить сухий ферментативний пептон, агар-агар, воду, та додатково містить суху адаптовану молочну суміш, а також залізо і лінолеву кислоту. Живильне середовище призначене для ефективного культивування мікобактерій туберкульозу, їх прискореного виявлення в інфікованому матеріалі (кров, мокротиння, сеча та інші).

Ефективність запропонованого живильного середовища полягає у його складі. Одночасно з цим збільшується вихід - "урожайність" мікобактерій туберкульозу на живильному середовищі, що забезпечує більш високу точність діагностики захворювання.

В результаті досліджень встановлено, що на середовищі, яке використовувалося як прототип, ріст мікобактерій всіх культур, які були узяті в дослід з'явився через 20 - 60 діб. На запропонованому середовищі через 24 години після термостатування відмічався ріст усіх культур. Через 72 години спостерігався газонний ріст колоній мікобактерій.

Якісний та кількісний вміст усіх компонентів в заявлених складах, є необхідними, оптимальними для проявлення їх позитивних властивостей та досягнення технічного результату.

Спосіб виділення збудника туберкульозу на живильному середовищі відповідно до заявленого рішення здійснюють у наступній послідовності.

Для виділення збудника туберкульозу готують живильне середовище, здійснюють підготовку патологічного матеріалу для його подальшого висіву на живильне середовище, при цьому посівний матеріал обробляють за загальновідомою методикою і, крім того, його обробляють запропонованим антисептиком з подальшим електромагнітним опроміненням і посівом на живильне середовище.

За контрольне живильне середовище брали Левенштейна – Йенсена. Контролем служили тесткультури мікроорганізмів: Mycobacterium tuberculosis H37 RV - збудник туберкульозу людей, Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, резистентний до всіх протитуберкульозних препаратів, Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, чутливий до всіх протитуберкульозних препаратів, Mycobacterium bobis - збудник туберкульозу великої рогатої худоби.

Як супутню мікрофлору використовували тест-культури Е. Соli (К 12), В.subtilis, S. epidermitidis (1225).

Підготовлений контрольний посівний матеріал перед висівом обробляють антисептиком та електромагнітним опроміненням протягом 30-60 хв. з послідуючим інкубуванням при температурі 36 ± 1°С протягом 22 - 24 годин і висівають на поживне середовище.

Потім патологічний матеріал (посівний матеріал - мокротиння, кров, спинномозкова рідина, частини тканин та інше), так само як і тест-культури мікроорганізмів, перед висівом обробляють антисептиком згідно співвідношення 1 : 1, з подальшою обробкою електромагнітним опроміненням, з потужностю 8 Герц, 50 Вт. протягом 30-60 хвилин, після чого термостатують протягом 24 - 48 годин при температурі 36 ± 1° С і висівають отриману посівну суспензію в чашки Петрі на живильне середовище у дозі 1 мл. Засіяні чашки Петрі не перевертають і розташовують в термостаті кришками догори, термостатують при температурі 36 ± 1°С протягом 1 - 5 діб. Поява росту колоній на 1 - 5 добу вказує на позитивний результат, а відсутність росту мікобактерій після 5 діб вважається негативним результатом, що підтверджує відсутність захворювання. Відсутність росту тест-культури Е. соlі, В. subtilis, S. epidermitidis на середовищі протягом 10 діб вказує на бактерицидну дію антисептика і при цьому допускається хороший ріст збудника туберкульозу.

При посіві крові інфікованих туберкульозом дослідних лабораторних тварин на середовище „САМОСУМ ” спостерігали на 1-4 добу ріст культур із всіх зразків у вигляді дрібних круглих колоній біло-сірих кольорів, що злилися в «газон».При мікроскопії з мазків культур 6-15 добового росту, що виросли з патматеріалу на середовищі, спостерігали червоні дрібні й великі коки, диплококи, овоїди, дрібні прямі й вигнуті палички.

При мікроскопії мазків, приготовлених з культур, що виросли на середовищі „САМОСУМ ” протягом 5 діб, спостерігали клітини рожево-червоних кольорів: вакуолі із зернистістю, великі коки, овоїди, товсті вигнуті палички, прямі тонкі палички із зернистістю й інші форми.

Отримані нами експериментальні дані дозволяють стверджувати, що мікобактерії здатні проявляти ріст на середовищі „САМОСУМ ” вже через 24 години.

Запропоноване поживне середовище САМОСУМ просте за способом його приготування, зручне при зберіганні і транспортуванні. Всі компоненти заявлених складових продаються в Україні, що є досить зручним для виробничих, науково-дослідних лабораторій ветеринарного та медичного профілю.