К.б.н. Хлус К.Н.
Буковинский государственный медицинский университет, Украина
ПАРАМЕТРЫ ОКСАЛАТЗАВИСИМОГО УГНЕТЕНИЯ IN VITRO АКТИВНОСТИ МЫШЕЧНОЙ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В
СВЯЗИ С ЕЁ ИЗОФЕРМЕНТНЫМ СПЕКТРОМ
Регуляция внутриклеточного
метаболизма посредством изменения как общей активности того или иного фермента,
так и его изоферментов, рассматривается в качестве одного из важнейших
механизмов адаптации конкретного организма к разнообразным изменениям
окружающей среды. В связи с этим особый интерес представляет исследование
механизма регуляции активности лактатдегидрогеназы (L-лактат: NAD+ оксидоредуктаза, ЛДГ, КФ 1.1.1.27), поскольку
перераспределение изоферментов ЛДГ в значительной степени отражает специфику
энергетического обмена клетки, а его нарушение может привести к тяжёлым
последствиям как на клеточном, так и на организменном уровне.
Одним из негативных
эффекторов – регуляторов активности ЛДГ – является щавелевая кислота, широко распространённая
в природе и являющаяся одним из конечных метаболитов в животных организмах.
Характерной особенностью оксалатов является чрезвычайное разнообразие
механизмов неблагоприятного воздействия на организм. Щавелевая кислота и её
водорастворимые соли изменяют кислотно-основное равновесие в организме, снижают
биодоступность биологически важных металлов, нарушают пищеварительную,
кардиоваскулярную и нейрональную функции, локомоцию и координацию движений,
вызывают развитие генетически обусловленных оксалозов (респираторный оксалоз,
гипероксалатурический хронический обструктивный бронхит), при которых
нарушается синтез ферментов, катализирующих реакции преобразования важнейших
эндогенных предшественников оксалатов [3]. В связи с этим оксалаты можно
рассматривать как один из опаснейших естественных
факторов экологической агрессии, а исследования
в этой области – актуальными и перспективными.
Цель данного исследования
- установление зависимости между оксалат-индуцированными изменениями активности
ЛДГ скелетных мышц белых крыс и её изоферментным составом. Предмет
исследования: безъядерные гомогенаты мышц задних конечностей белых крыс
возрастом 6-12 мес. (n=8). Объект исследования: связь
между степенью ингибирующего влияния in vitro щавелевой кислоты (в конечной
концентрации
Изоферментный
спектр ЛДГ определяли с помощью диск-электрофореза в ПААГ [2]. Концентрацию белка определяли по
методу Лоури [4]. Результаты исследования
представлены в таблице. Щавелевая кислота оказывает существенное угнетающее действие
на ЛДГ (8,5-52,5 %). Соотношение активностей отдельных изоферментов выявило
преобладание анаэробных фракций – ЛДГ4
и ЛДГ5 (соответственно, 27,46 и 34,28 %, суммарно 61,74 %).
Наименее выраженным
угнетение ЛДГ-реакции оказалось в пробах с наибольшим содержанием М-субъединиц ЛДГ. Как известно, анаэробные фракции
ЛДГ, преобладающие в мышечной ткани, относятся к М-типу фермента (М4 – ЛДГ5, НМ3 – ЛДГ4).
Можно предположить, что М-субъединицы ЛДГ, в отличие
от Н-субъединиц, обладают меньшей чувствительностью к действию оксалат-аниона,
что подтвердил последующий корреляционный анализ. Таким образом, щавелевая
кислота в концентрации
Таблица.
|
№
вари-анты |
Угне-тение ЛДГ-реакции,
% |
Активность изоферментов ЛДГ и
содержание субъединиц, % |
||||||
|
ЛДГ1 |
ЛДГ2 |
ЛДГ3 |
ЛДГ4 |
ЛДГ5 |
H-субъ-единицы |
M-субъ-единицы |
||
|
1 |
52.4 |
18.0 |
26.8 |
19.9 |
15.7 |
19.6 |
51.975 |
48.025 |
|
2 |
43.3 |
14.3 |
21.1 |
16.8 |
18.2 |
29.6 |
43.075 |
56.925 |
|
3 |
9.8 |
5.6 |
10.1 |
10.7 |
34.6 |
39.0 |
27.175 |
72.825 |
|
4 |
8.5 |
4.4 |
8.6 |
8.0 |
37.5 |
41.5 |
24.225 |
75.775 |
|
5 |
19.8 |
6.1 |
11.9 |
12.0 |
30.3 |
39.7 |
28.60 |
71.40 |
|
6 |
23.0 |
8.5 |
13.4 |
13.1 |
29.2 |
35.8 |
30.40 |
67.60 |
|
7 |
31.4 |
10.2 |
15.8 |
13.7 |
26.1 |
34.2 |
35.425 |
64.575 |
|
8 |
26.5 |
9.5 |
14.6 |
13.0 |
28.1 |
34.8 |
33.975 |
66.025 |
|
x±Sx |
- |
9,58± 0,618 |
15,29± 0,805 |
13,40± 0,487 |
27,46± 0, 997 |
34,28± 0,937 |
34,61± 1,190 |
65,39± 1,215 |
Литература:
1.
Методы
биохимических исследований (липидный и энергетический обмен) / Под ред. М.И.
Прохоровой. – Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. – 272 с.
2.
Назыров
А.Т., Алманиязова К.К. К методике оценки результатов диск-электрофореза в
полиакриламидном геле // Лаб. дело. – 1976. – № 12. – С. 250-251.
3.
Поспехова
Г.П., Антонов В.Г., Разоренова Т.С., Вахарловский В.Г. Клинический полиморфизм
при респираторном оксалозе // Терапевт. архив. – 2001. – № 3. – С. 55-57.
4.
Lowry O., Rosebrough W., Farr A.,
Randall R. Protein measurement with folin phenol reagent // J. Biol. Chem. –
1951. – Vol. 193, № 1. – P. 265-275.